智立中特(武汉)生物科技有限公司

　　导致细胞生长缓慢的常见原因：

一、培养基可能缺乏细胞生长所需的某种因子，出现这种情况一般都是小伙伴们购买细胞后没有按照ATCC或国内细胞库的方法配制培养基，就使用实验室师兄师姐用的培养基去养细胞。处理方法一般来说就是按照方法配制培养基，或是直接购买所养细胞专用的培养基。

二、细菌、支原体、真菌等污染：虽然现在培养基里面一般都会添加双抗(和)，但是如果无菌操作观念不强，依然很有可能导致污染。处理方法：如果有冻存的细胞，就可以把污染的细胞丢弃处理，当然，丢弃不是随意扔进垃圾桶就可以了，要按照实验室生物安全规范操作进行。然后重新复苏培养，建议把培养箱进行全面的消毒处理。若是没有冻存，而这种细胞又是很珍贵的，常见的处理方法就是药物处理：细菌污染加5-10倍的抗生素；真菌污染就加抗真菌药物；支原体污染就加抗支原体药物，具体药物可以咨询相关公司的技术支持，他们会比较专业。

三、很多细胞的生长存在密度依赖性，如果传代后，细胞的密度太小，也是会影响到细胞生长的。这个时候没什么特别好的处理办法，只得勤换液。如果细胞培养瓶使用的是T75倒可以消化、离心、重悬，然后接种到T25的培养瓶中培养。

四、冻存细胞DMSO(二甲基亚砜)加的量不正确，没有逐步梯度降温。下次复苏后的细胞总是长不好。处理方法：按照的冻存方式配制冻存液。有的细胞适合10%的DMSO，有的细胞适合5%；严格遵守逐步梯度降温原则，细胞复苏时快速解冻。

五、换液间隔时间太长，有的小伙伴养细胞真的很“佛系”，想起了就去换个液，信奉一句话“你已经是成熟的细胞了，应该学着自己觅食，成长”。这种情况下细胞培养瓶中就会积累很多细胞代谢废物，影响细胞活性。建议：勤换液

六、细胞“消化”时间过长，对细胞造成损伤；另外中一般会添加EDTA，螯合钙离子，影响细胞贴壁。处理方法：控制好细胞“消化”时间，尽量去除干净和其中的EDTA.

七、PH：细胞需要在一定的PH值下生长，这个道理小伙伴们都懂。但是很多时候PH都是我们忽略的，也是小编今天要强调的一点。我们使用的培养基可能会随着使用时间的加长而缓慢变碱哦！(当然，也有可能会变酸，但常见的是变碱)，一般来说，过碱的培养基会影响到细胞生长。处理方法：简单的就是换新鲜培养基呗！当然，如果有时间和有条件也可以调一调培养基的PH值。

细胞增殖变慢有以下原因：

1.消化过度2.传代过密3.细胞营养不良4.细胞频繁传代5.细胞状态不佳或老化6.细胞存在污染。

一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲系统，而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3含量为每公升3.7 g时，细胞培养时应使用10%CO2；当培养基中NaHCO3为每公升1.5 g时，则应使用5%CO2培养细胞。

定期(每周一次)更换水盘里面的水，水盘的水必须使用无菌蒸馏水或无菌去离子，水盘中可添加1％硫酸铜以预防霉菌污染。

依照细胞株基本数据上的接种密度或稀释分盘的比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长的一个重要原因。按照我们的经验：一般倍增时间24 h内的细胞，传代比率1:6-1:12为宜，倍增时间24-48 h的细胞，传代比率1:3-1:8为宜，倍增时间超过48h的细胞,传代比率1:2-1:4为宜。

智立中特（武汉）生物科技有限公司主要致力于质粒微生物资源的保护、共享和持续利用，围绕我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展等重大需求，探索、发现、收集国内外的微生物资源，妥善长期保存管理；在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供质粒载体物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。旗下质粒载体网是一款提供质粒载体展示及定制的专业型网站，由智立中特（武汉）生物科技有限公司联合多家企业公司科研院校共同打造！主要展示了各种基因类型下的质粒载体！